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根据我们的调查，现在有一些水产养殖动物病害检测单位，在完成患病水产养殖动物体内分离致病菌株的药物敏感性检测时，采用的实验方法大多是所谓的。其实，这种方法用于确定分离菌株对某种抗微生物药物是否敏感，作为定性的方法是具有现实意义的。但是，将这种实验方法获得的实验结果，用于指导水产养殖业者治疗患病水产养殖动物的疾病时，定性的实验结果就
因为只有在获得抗微生物药物对分离菌株的最小抑菌浓度（MIC）后，才有可能根据不同水产养殖动物对抗微生物药物的生物利用度等数据，计算出采用某种抗微生物药物对患病水产养殖动物疾病治疗的药物剂量。也就时说，纸片法或者牛津杯法（K-B法），只能用于确定抗微生物药物对分离菌株是否敏感的定性实验，而只有试管法和微量板法，才能检测抗微生物药物对分离菌株的MIC。也就时说，如果完成抗微生物药物敏感性实验的目的，是在于指导水产养殖业者科学、精准地使用抗微生物药物治疗水产养殖动物的细菌性疾病的话，只有采用试管法或者微量板法完成药物敏感性检测实验结果，才是有可能的。
摘要：本文简要介绍了对患病水产养殖动物体内获得分离菌株，完成药物敏感性检测时，如果采用的实验方法K-B法，其结果就只能用于确定分离菌株对某种抗微生物药物是否敏感，作为定性的方法是具有现实意义的。但是，这种实验方法获得的结果，难以指导水产养殖业者在治疗水产养殖动物的疾病时，帮助水产养殖业者实现精准用药。只有利用试管或者微量板法获得抗微生物药物对分离菌株的最小抑菌浓度（MIC）后，才有可能根据不同水产养殖动物对抗微生物药物的生物利用度等数据，计算出采用某种抗微生物药物对患病水产养殖动物疾病治疗的药物剂量。
利用抗微生物药物治疗人类与畜、禽、水产养殖动物的细菌性疾病，是国内、外治疗动、植物细菌性疾病的普遍做法。但是，抗微生物药物在治疗细菌性疾病的过程中，会导致细菌产生的耐药性（drug resistance）的问题，而且细菌耐药性的快速蔓延问题，正在越来越严重地影响到抗微生物药物治疗动、植物细菌性疾病的疗效。尤其是致病性细菌对抗微生物药物的耐药性问题，已经在全世界范围内引起了对人类健康的关注。
从2015年5月开始，世界卫生组织（world health organization，WHO），将每年11月的第三周，确定为世界提高抗微生物药物认识周。目的就在于提高人们对抗微生物药物耐药性快速蔓延的警惕，通过有效的沟通、教育和培训，提高人们对抗微生物药物耐药性问题的认识和理解，旨在避免耐药性致病性细菌感染的快速蔓延与相关疾病的暴发。
由于致病性细菌对抗微生物药物产生耐药性，导致抗微生物药物在防控致病性细菌感染中失去疗效，各种致病性细菌感染变得越来越难以有效地防控，这将持续威胁着人类有效防控各种细菌感染的能力。
我国对细菌耐药性防控工作非常重视，2016年国家卫生健康委联合14部委，印发了《遏制细菌耐药国家行动计划（2016-2020年）》；2022年，由国家卫生健康委、国家药监局等13个部门，再次联合发布了《遏制微生物耐药国家行动计划（2022-2025年）》。颁布国家行动计划的目的，就是指导对抗微生物药物的合理应用，减少不必要的抗微生物药物使用，营造全社会关心、支持和参与抗微生物药物合理使用的良好氛围。为了响应国家的行动计划，农业农村部还制定了相应的《动物源细菌耐药性监测计划》，旨在规范我国抗微生物兽药的科学规范使用。
水产养殖动物的细菌性疾病种类较多。在我国“国标渔药”中也有一些主成分为抗微生物药物的“国标渔药”。如何科学、规范地使用抗微生物药物的“国标渔药”，对于有效遏制危害水产养殖动物的细菌性疾病是非常重要的。如果这个环节做不好，危害水产养殖动物的致病性细菌产生的耐药性，也是可以通过细菌的耐药质粒（R+）将耐药性传递到人类致病性细菌中，给人类健康造成严重威胁的。
下面简要地介绍我们这些年来，为控制控水产养殖动物各种疾病，提倡检测致病性生物药物敏感性的基础上，筛选适宜的“国标渔药”，精准确定用药剂量后治疗患病水产养殖动物的相关工作。旨在为广大的水产养殖业者提供科学防控水产养殖动、植物疾病的参考。
该方法是将含有定量抗菌药物的药敏片，贴在已接种了待测试致病菌的琼脂培养基表面上，药敏片中所含的药物在琼脂培养基中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，在纸片的周围形成药物浓度梯度。导致药敏片周围能抑菌的药物浓度范围内的供试致病菌不能生长，而处于药物抑菌浓度范围外的致病菌则可以生长。因此，在药敏片周围形成透明的抑菌圈。不同抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂培养基中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小即可以反映测试致病菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试致病菌的MIC呈负相关。
与此同样的原理，也可以采用牛津杯完成这类K-B法实验。即在盛有培养的平皿中均匀地涂上供试致病菌液，将牛津杯置放于涂有供试致病菌液的培养皿中，再将已经确定好药物浓度的定量抗微生物药物的药液，添加在牛津杯内，抗微生物药物在琼脂内向四周扩散，其药物浓度呈梯度递减。因此，在抗微生物药物药液扩散周围一定距离内的供试致病菌生长受到抑制。在经过一定时间培养后可形成一个抑菌圈（图1）。抑菌圈越大，说明该供试致病菌对这种抗微生物药物就越敏感，反之就敏感性越差。
注：操作方法是在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面，要求涂布均匀致密。
以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（内径6nm、外径8nm、高10nm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，并在小管处标记各种药物名称。每个平板可放4~6支小管。等待5min后，分别向各小管中滴加一定数量的各种药液，勿使其外溢。置适当温度条件下培养一定时间，观察结果。
若无抑菌圈形成，就说明该供试细菌对此供试药物具有耐药性。其抑菌圈直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系。因此，药敏试验结果，应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准（表1）。
注：（1）具体对于不同的致病菌菌株，不同的抗生素纸片需参照NCCLs的标准或者CLSI标准。（2）药敏试验判定标准参考表1，多黏菌素抑菌圈；在9mm以上为高敏，6~9mm为低敏，无抑菌圈为不敏。
根据我们的调查，现在有一些水产养殖动物病害检测单位，在完成患病水产养殖动物体内分离致病菌株的药物敏感性检测时，也许就是为了图方便，采用的药敏实验方法大多是K-B法。其实，这种方法用于确定分离菌株对某种抗微生物药物是否敏感，作为为抗微生物药物定性的方法是具有现实意义的。但是，如果是将这种药敏实验方法获得的实验结果，用于指导水产养殖业者治疗患病水产养殖动物的疾病时，这种定性的药敏实验结果就难以帮助水产养殖业者计算治疗疾病的用药剂量，不能达到精准用药的目的了。
如果药敏试验旨在指导水产养殖业者实现科学、精准使用抗微生物药物治疗患病水产养殖动物的疾病，就需要在获得抗微生物药物对分离菌株的最小抑菌浓度（MIC）后，才有可能根据不同水产养殖动物对抗微生物药物的生物利用度等数据，计算出采用某种抗微生物药物对患病水产养殖动物疾病治疗的药物剂量。因为采用纸片法或者牛津杯法（K-B法），完成的试验结果，只能用于判定抗微生物药物对分离菌株是否敏感的定性，而只有利用试管法（图2）和微量板法（图3），完成的药敏试验是能检测抗微生物药物对分离菌株MIC的。
如果完成抗微生物药物敏感性实验的目的，就是为了指导水产养殖业者科学、精准地使用抗微生物药物治疗水产养殖动物的细菌性疾病的话，只有采用试管法或者微量板法完成的药物敏感性实验结果，才是有可能的。
要让“国标渔药”能有效地治疗患病水产养殖动物的疾病，完成“国标渔药”对致病性生物的药物敏感性实验是必不可少的。首先，根据药敏实验的结果，可以选择到适宜的水产用“国标渔药”；其次，因为药物治疗动、植物的疾病需要遵循“量-效关系，dose-response relationship”，而要精准地确定某种药物治疗疾病的用药剂量，就必须知道致病性生物对所用药物的最小抑菌浓度（MIC）。需要根据MIC计算出用于治疗患病水产养殖动物的用药剂量，因为对水产养殖动物用药与对待陆生动物用药的方式有所不同，譬如对水产养殖动物使用抗微生物药物，就只能将去拌合在水产养殖动物的饲料中，制备成药物饵料后投喂水产养殖动物的口服方式。
因为水产养殖动物的种类与规格不同，即使对于同一种抗微生物药物的生物利用度也是存在差异的，而且养殖水体温度、水体pH、饲料成分以及颗粒大小等不同，均可能影响到患病水产养殖动物对于药物饲料中药物的吸收量与利用程度的差异。因此，根据药敏实验检测到的抗微生物药物对致病性细菌的MIC，乘以对不同种类水产养殖动物的用药系数，就是每公斤水产养殖动物的用药量毫克数。
因为只有采用试管法或者微量板法完成的药物敏感性实验结果，才是检测到抗微生物药物对致病性细菌的MIC。而采用K-B法完成的药敏实验，是无法获得抗微生物药物对致病性细菌的MIC的。因此，要指导水产养殖业者实现科学、精准地使用抗微生物药物治疗患病水产养殖动物的疾病，采用试管与微量板法完成药物实验，获得抗微生物药物对致病性生物的MIC后，才是有可能的。